背景简介：

近年来，质谱（MS）技术在蛋白质组学领域扮演着至关重要的角色，尤其在分析蛋白质及其翻译后修饰方面。随着高分辨率MS技术的进步，我们现在能够对复杂生物样本中的蛋白质表达进行精确量化。此外，结合特定修饰的富集策略，MS技术能够对数千种可逆的蛋白质修饰，如磷酸化、乙酰化和泛素化，进行定量分析。泛素化肽段在样本中含量较低，易受其他肽段的干扰，因此在质谱分析前需进行有效富集。

氨探生物的创新解决方案

针对泛素化肽段的低丰度和实验挑战，氨探生物开发了一款高性能泛素化蛋白质组学富集试剂盒。该试剂盒采用高亲和力的泛素化抗体，特异性富集样本中的泛素化肽段，并结合数据非依赖的DIA非标记蛋白质定量技术，实现大规模泛素化蛋白质的准确定性与定量分析。经过广泛的样品测试，该试剂盒被证实能提供高质量、可靠且可重现的蛋白质组学数据。

• 实验步骤

泛素化蛋白质组学富集试剂盒（A086-kit）是为组织、细胞等生物样本设计的专用工具，旨在高效富集和分析泛素化蛋白质。使用步骤包括：胰酶消化生物样本以产生肽段混合物；将特异性抗体与琼脂糖珠结合，构建富集系统；利用试剂盒选择性富集K-GG修饰肽段；收集并冻干洗脱液，为质谱分析做准备（图1）。

图1. 泛素化蛋白质组学富集试剂盒的蛋白质组学前处理流程图

• A086-kit富集回收率评估

首先，将A086-kit对JPT K-gg标准肽进行富集，评估富集的效率和回收率，并与CST-kit进行对比。实验结果显示，A086-kit能够高效地富集JPT K-gg标准肽，并具有更高的回收率（图2A-B）。

图2:两种抗体珠富集JPT标准K-gg肽段性能展示。

（A）K-gg标准肽的质谱信号强度和两种抗体珠富集后K-gg的质谱信号强度。

（B）两种抗体珠富集回收率。

• A086-kit富集细胞样品性能评估

为了评估新开发的泛素化蛋白质组学富集试剂盒（A086-kit）的性能，将其与CST-kit进行了对比分析。在两项技术中，在1mg 293T酶切肽段样品中均鉴定出了超过12,000个K-gg修饰肽段(图3A)。超过80%的K-gg修饰肽段在两种方法中均有重叠(图3B)，这一结果不仅证明了A086-kit在鉴定K-gg修饰肽方面的高效性，同时也表明了不同方法间在检测泛素化肽段时具有很高的一致性。这些发现进一步验证了A086-kit的可靠性，并为其在泛素组学研究中的应用提供了坚实的基础。

图3. A086-kit与CST-kit的性能比较

（A）A086-kit和CST-kit抗体珠鉴定K-gg修饰肽段数目。

（B）A086-kit和CST-kit抗体珠鉴定的重叠K-gg肽段。

• A086-kit重现性评估

为了验证泛素化蛋白质组学富集试剂盒（A086-kit）的稳定性，对三个独立的293T细胞样本进行了泛素组分析。在仅1mg的样本量下，成功鉴定出了超过11,000个K-gg修饰肽段和约2,700个修饰蛋白（图4A-B）。

在这些鉴定结果中，超过96%的K-gg修饰肽段和修饰蛋白在三个样本中均有重叠（图4C-D），这一高度一致性表明了泛素化蛋白质组学富集试剂盒（A086-kit）在泛素组分析中的可靠性。进一步分析显示，其中约7,600个K-gg修饰肽段和2,000个泛素化蛋白的系数变化（CV）低于20%（图4E-F）。

图4. A086-kit富集重现性性评估。

（A）A086-kit抗体珠鉴定K-gg修饰肽段数目。

（B）A086-kit抗体珠鉴定K-gg修饰蛋白数目。

（C）A086-kit抗体珠鉴定的重叠K-gg修饰肽段。

（D）A086-kit抗体珠鉴定的重叠K-gg修饰蛋白。

（E）K-gg修饰肽段强度的CV分布。

（F）K-gg修饰蛋白强度的CV分布。

总结：

氨探生物创新地推出了一种新型K-gg抗体，该抗体能够简便、高效地富集K-gg修饰肽段，并已将其整合成泛素化蛋白质组学富集试剂盒A086-kit。这套试剂盒适用于组织、细胞等多种生物样本，能够针对性地富集K-gg修饰肽段。即使在仅需1mg样本量的条件下，也能鉴定出超过11,000个K-gg肽段和2,700个蛋白。这一创新性的突破使得在有限的样本量下，实现对泛素化组学的深入分析。

欢迎与氨探生物联系进行试用，体验A086-kit带来的高效和便捷！

Reference：

(1) Ye, Y. & Rape, M. Building ubiquitin chains: E2 enzymes at work. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 10, 755–764 (2009).

(2) Udeshi, N.D. et al. Methods for quantification of in vivo changes in protein ubiquitination following proteasome and deubiquitinase inhibition. Mol. Cell Proteomics 11, 148–159 (2012) .